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(保定创锐泵业)纸层析法测定叶绿素介绍

时间:2021-06-03 18:15 点击:
纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法,其原理主要是利用混合物中各组分在;流动相和固定相的分配比(溶解度)的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相(滤纸纤维常能吸20%左右的水),有机溶剂如乙醇等为流动相,色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上,当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下,连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时,试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动,并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快,移动距离较远;分配比较小的物质移动较慢,移动距离较近,试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上,从而达到分离。  
关键词:纸层析,叶绿素,分离,速度  
前言:初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。叶绿体中有几种色素。胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b随层析液在滤纸上扩散速度不同,可以分出四条色素带。  
材料和方法: (一)材料: 
用具:剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml量筒一只,天平一只,试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片    
试剂:丙酮、无水乙醇、层吸液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成)、二氧化硅、碳酸钙、碳酸钠    材料:新鲜的菠菜叶、青菜叶  
(二)方法和步骤: 
 1.提取绿色叶片中的色素 (1)取几片绿色的叶片,去掉叶柄和主脉,用天平称取 5g 叶片,剪碎,放 入研钵中。  
(2)向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙,进行充分的研磨。用量筒量取 5 ml 丙酮,倒入研钵中,迅速充分研磨。  
(3) 将研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中进行过滤。 将滤液收集到一个小试管中, 及时用棉塞将试管目塞紧。  
2.制备滤纸条 取一块预先干燥处理过的定性滤纸,将滤纸剪成长 10 cm、宽 1cm 的滤纸 条,在距滤纸条一端 1cm 处用铅笔画一条细的横线。  
3.画滤液细线、 用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀地画出一条细而直的滤液细线。待 滤液于后,再画 2~3 次。  
4.分离叶绿体中的色素 将 3 mL 层析液倒入烧杯中,将滤纸条(有滤液细线的一端朝下)略微料靠着 烧杯的内壁,轻轻地插入到层析液中,随后用培养皿盖盖上烧杯;(注意,不能让滤纸上的滤液细线触到层析液。纸层析法中所用的有机
溶剂如丙酮等,一般有挥发性、并有一定毒性,使用时要注意密封层析,避免吸入过多有害挥发物。)结果: 经过10—15分钟后,观察分离后色素带的分布。**上端橙黄色为胡萝卜素,其次
黄色为叶黄素,再下面蓝绿色为叶绿素a,**后的黄绿色为叶绿素b。  
讨论与分析: 
分析:纸层析法依据极性相似相容原理,是以滤纸纤维的结合水为固定相,而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同,因而扩散速度不同,从而达到分离的目的。一般用于叶绿体中色素的分离,叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、 

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